Search the repository

A+ | A- | | SLO | ENG

Keywords: human papillomaviruses, trafficking, sorting nexins
Published in RUNG: 20.07.2017; Views: 4760; Downloads: 0
This document has many files! More...

Abstract: Human Papillomavirus (HPV) infection involves multiple steps, from cell attachment, through endocytic trafficking towards the trans-Golgi network, and, ultimately, the entry into the nucleus during mitosis. An essential viral protein in infectious entry is the minor capsid protein L2, which engages different components of the endocytic sorting machinery during this process. The ESCRT machinery is one such component that seems to play an important role in the early stages of infection. Here we have analysed the role of specific ESCRT components in HPV infection, and we find an essential role for VPS4. Loss of VPS4 blocks infection with multiple PV types, suggesting an evolutionarily conserved critical step in infectious entry. Intriguingly, both L1 and L2 can interact with VPS4, and appear to be in complex with VPS4 during the early stages of virus infection. By using cell lines stably expressing a dominant-negative mutant form of VPS4, we also show that loss of VPS4 ATPase activity results in a marked delay in capsid uncoating, resulting in a defect in the endocytic transport of incoming PsVs. These results demonstrate that the ESCRT machinery, and in particular VPS4, plays a critical role in the early stages of PV infection.
Keywords: HPV, ESCRT machinery, infection
Published in RUNG: 08.05.2017; Views: 4452; Downloads: 271
Full text (1,10 MB)

Abstract: Diplomsko delo obravnava vpliv onesnažil iz okoljskih aerosolov na dva celična tipa, ki jih najdemo v pljučih, pljučne epitelijske celice A549 in makrofage J774A.1. Kot vir onesnažil smo uporabili ekstrakt saj iz zračnega filtra. Uporabili smo kvarčne zračne filtre z delci črnega ogljika, ki so nastali kot posledica gorenja sveče. V laboratorijskih poskusih smo testirali neposredni vpliv saj na celično živost (viabilnost) pljučnih epitelijskih celic in makrofagov po 24 urah in 48 urah inkubacije z različnimi koncentracijami saj in kontrolama. Celično živost smo merili s pomočjo reagenta Presto Blue. Posreden vpliv saj na pljučne epitelijske celice smo preverjali z merjenjem celične živosti po 24 urah in 48 urah inkubacije s topnimi dejavniki, ki so jih sprostili tretirani in kontrolni makrofagi (gojišče MCM). Gojišče MCM smo pripravili tako, da smo makrofage 48 ur aktivirali z raztopino saj oziroma jih nismo aktivirali (kontrolno gojišče MCM). Na koncu smo pri obeh celičnih tipih ugotavljali tudi gensko stabilnost s pomočjo posredne imunofluorescentne metode. Celice smo označili s protitelesi anti-fosfo histon H2A.X, ki so se vezala na mesta, kjer je zaradi izpostavljenosti raztopini saj prišlo do poškodb DNA. Rezultati so pokazali, da raztopina saj vpliva na celično živost pljučnih epitelijskih celic in makrofagov v obratno sorazmernem trendu v odvisnosti od koncentracije saj. Raztopina saj je imela vpliv tudi na morfološke spremembe obeh celičnih linij. Rezultati vpliva topnih dejavnikov makrofagov na epitelijske pljučne celice niso pokazali statistično značilnih razlik, zato posrednega vpliva saj na viabilnost pljučnih celic zaradi kompleksnosti delovanja topnih faktorjev makrofagov nismo dokazali. Pokazali pa smo, da imajo saje velik vpliv tudi na gensko stabilnost pljučnih epitelijskih celic in makrofagov. V diplomskem delu smo tako pokazali, da že krajša izpostavljenost onesnažilom iz zraka vodi do poškodb DNA in zmanjšane celične živosti tarčnih celic, kar je bilo še zlasti izrazito pri makrofagih.
Keywords: makrofagi, pljučne epitelijske celice, delci, policiklični aromatski ogljikovodiki, celična živost, genotoksičnost.
Published in RUNG: 09.03.2016; Views: 6807; Downloads: 195
Full text (7,73 MB)